文章目录

1 材料方法

1.1 病蟹来源

1.2 主要仪器和试剂

1.3 病蟹初检

1.4 病菌分离

1.5 人工感染实验

1.6 病原鉴定

    1.6.1 形态观察

    1.6.2 生理生化特性

    1.6.3 分子生物学鉴定

1.7 扫描电镜样品制备

1.8 河蟹“牛奶病”的流行情况调查

2 结果

2.1 病蟹典型症状与初步检查

2.2 菌株的分离与致病性

2.3 病原菌鉴定

    2.3.1 菌体形态与生化特性

    2.3.2 分子生物学鉴定

2.4 扫描电镜观察

2.5 河蟹“牛奶病”流行情况调查

3 分析与讨论

4 结语

文章摘要:针对2020年4月—5月天津地区暂养的中华绒螯蟹（Eriocheir sinensis）扣蟹大规模暴发的"牛奶病",开展了病原分离、鉴定和致病性研究。从发病扣蟹体内分离到1株优势菌JMB-1,注射感染试验证实该菌株对中华绒螯蟹具有较强致病性,死亡率100%,病症与自然发病蟹相同;采用浸浴方式也可感染健康中华绒螯蟹,感染率相对较低,从濒死蟹体内可分离到形态与JMB-1一致的菌株。采用细菌分离、显微镜观察、PCR等技术排除细菌、中华绒螯蟹螺原体、血卵涡鞭虫、对虾白斑综合征病毒等病原的原发感染,确定菌株JMB-1为本次"牛奶病"的唯一确定病原。通过形态观察、生理生化试验及18S rRNA、26S rRNA、ITS基因序列分析将菌株JMB-1鉴定为二尖梅奇酵母（Metschnikowia bicuspidata）。扫描电镜结果显示,病蟹肝胰腺、肌间隙及结缔组织中存在大量出芽生殖的病原菌。2020年5月—10月,对天津地区稻田中养殖的中华绒螯蟹扣蟹及成蟹进行检测,未发现二尖梅奇酵母,推测"牛奶病"的暴发与养殖环境密切相关。

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